Monocytes subpopulations pattern in the acute respiratory syndrome coronavirus 2 virus infection and after long COVID-19.

INTRODUTION AND OBJECTIVE: The present study sought to characterize the pattern of monocyte subpopulations in patients during the course of the infections caused by SARS-CoV-2 virus or who presented long COVID-19 syndrome compared to monocytes from patients with zika virus (Zika) or chikungunya virus (CHIKV). CASUISTRY: Study with 89 peripheral blood samples from patients, who underwent hemogram and serology (IgG and IgM) for detection of Zika (Control Group 1, n = 18) or CHIKV (Control Group 2, n = 9), and from patients who underwent hemogram and reverse transcription polymerase chain reaction for detection of SARS-CoV-2 at the acute phase of the disease (Group 3, n = 19); and of patients who presented long COVID-19 syndrome (Group 4, n = 43). The monocyte and subpopulations counts were performed by flow cytometry. RESULTS: No significant difference was observed in the total number of monocytes between the groups. The classical (CD14++CD16-) and intermediate (CD14+CD16+) monocytes counts were increased in patients with acute infection or with long COVID-19 syndrome. The monocytes subpopulations counts were lower in patients with infection Zika or CHIKV. CONCLUSION: Increase in the monocyte subpopulations in patients with acute infection or with long COVID-19 syndrome may be an important finding of differentiated from the infection Zika or CHIKV.

Análise dos Critérios Imunofenotípicos por Citometria de Fluxo para Definição das Doenças Linfoproliferativas Crônicas de Células B / Analysis of Immunophenotypic Criteria by Flow Cytometry to Define B-Cell Chronic Lymphoproliferative Diseases / Análisis de Criterios Inmunofenotípicos por Citometría de Flujo para Definir Enfermedades Linfoproliferativas Crónicas de Células B

Introdução: A citometria de fluxo é uma metodologia importante para o diagnóstico das doenças linfoproliferativas crônicas de células B (DLPCB), contudo, por vezes, o citometrista não encontra subsídios suficientes para a definição exata da entidade patológica envolvida. Objetivo: Analisar os laudos emitidos a pacientes com doenças linfoproliferativas crônicas (DLPC) atendidos em um laboratório particular de Belém-PA, segundo os critérios de classificação estabelecidos pelos estudos de Matutes et al. e Craig e Foon. Método: Estudo retrospectivo com laudos de pacientes que realizaram imunofenotipagem por citometria de fluxo para diagnóstico de DLPCB no período entre setembro de 2015 a dezembro de 2019. Resultados: Depois de aplicados os critérios de Matutes et al. e Craig e Foon para os laudos analisados, observou-se concordância em: 45,24% casos de leucemia linfoide crônica de células B/linfoma linfocítico de pequenas células B; 14,29% casos de linfoma folicular; 4,76% casos de leucemia de células pilosas; e 21,43% de casos definidos como "outras DLPCB não classificáveis por citometria de fluxo". Entretanto, o teste de hipóteses de Hotelling (p=0,0409) mostrou haver diferença estatística para a definição das DLPCB segundo os critérios aplicados. Conclusão: Os resultados ressaltam que, mesmo sendo a citometria de fluxo importante para a caracterização das DLPCB, por vezes, o citometrista necessita incluir no laudo a categoria "outras doenças linfoproliferativas crônicas de células B não classificadas por citometria de fluxo" para induzir o prescritor a solicitar mais exames complementares.

Introduction: Flow cytometry is an important methodology for the diagnosis of chronic B-cell lymphoproliferative diseases (CBCLPD), however, sometimes the cytometrist does not find sufficient elements for the exact definition of the pathological entity involved. Objective: To analyze the reports issued to patients with chronic lymphoproliferative diseases (CLPD) tested at a private laboratory in Belém-PA, according to the classification criteria established by the studies by Matutes et al. and Craig and Foon. Method: Retrospective study with reports of patients who underwent immunophenotyping by flow cytometry for the diagnosis of CBCLPD from September 2015 to December 2019. Results: After applying the criteria by Matutes et al. and Craig and Foon to the reports analyzed, agreement was reached for 45.24% of the cases of chronic b-cell lymphocytic leukemia/small B-cell lymphocytic lymphoma, 14.29% of the cases of follicular lymphoma, 4.76% of the cases of hairy cell leukemia and 21.43% of the cases defined as "other CBCLPDs not classifiable by flow cytometry". However, Hotelling's hypothesis test (p=0.0409) showed a statistical difference for the definition of CBCLPD according to the criteria adopted. Conclusion: The results emphasize that even though flow cytometry is important for the characterization of CBCLPD, sometimes the cytometrist needs to include the category "other chronic B-cell lymphoproliferative diseases not classified by flow cytometry" in the report to induce the prescriber to request additional complementary exams.

Introducción. La citometría de flujo es una metodología importante para el diagnóstico de enfermedades linfoproliferativas crónicas de células B (ELPCB), sin embargo, en ocasiones el citometrista no encuentra suficientes subsidios para la definición exacta de la entidad patológica involucrada. Objetivo: Analizar los informes emitidos a pacientes con enfermedades linfoproliferativas crónicas (ELPC) tratados en un laboratorio privado en Belém-PA, de acuerdo con los criterios de clasificación establecidos por los estudios de Matutes et al. y Craig y Foon. Método: Retrospectivo con relatos de pacientes que se sometieron a inmunofenotipificación por citometría de flujo para el diagnóstico de ELPC de septiembre de 2015 a diciembre de 2019. Resultados: Tras aplicar los criterios de Matutes et al. y Craig y Foon a los informes analizados, se observó concordancia en: 45,24% de los casos de leucemia linfocítica crónica de células B/linfoma linfocítico de células B pequeñas; 14,29% casos de linfoma folicular; 4,76% casos de leucemia de células peludas; y 21,43% de los casos definidos como "otros ELPCB no clasificables por citometría de flujo". Sin embargo, la prueba de hipótesis de Hotelling (p=0,0409) mostró diferencia estadística para la definición de ELPCB según los criterios aplicados. Conclusión: Nuestros resultados enfatizan que si bien la citometría de flujo es importante para la caracterización de ELPCB, en ocasiones el citometrista necesita incluir en el informe la categoría "otras enfermedades linfoproliferativas crónicas de células B no clasificadas por citometría de flujo" para inducir al prescriptor a solicitar más exámenes complementarios.

O impacto da automação da fenotipagem eritrocitária estendida na rotina de um serviço de hemoterapia / The impact of automation of extended erythrocyte phenotyping in the routine of a blood transfusion center

Objetivos. Avaliar o impacto da automação na fenotipagem eritrocitária expandida e o nível de concordância dessa com a metodologia manual em amostras de doadores de sangue atendidos no hemocentro coordenador da Fundação HEMOPA no período de janeiro a dezembro de 2019. Material e Métodos. Foram analisadas 2.700 fenotipagens eritrocitárias realizadas por metodologia manual e automatizada através do equipamento IH500 da BioRad®. Os resultados foram testados quanto ao nível de concordância através do teste de Coeficiente Kappa. Resultados. Das amostras fenotipadas 98,6% (2.662/2.700) foram concordantes em ambas as metodologias e apenas 1,4% (38/2700) foram discordantes. Das 38 amostras discordantes 31,6% referiram-se ao fenótipo Lu(b); 15,8% ao fenótipo Lu(a); 13,1% ao fenótipo Fy(b); 7,9% aos fenótipos Le(b), E, c; 5,3% aos fenótipos N, S, s, Kp(a), P1; e 2,6% aos fenótipos M, Jk(a), Jk(b), Fy(a). Conclusões. O nível de concordância entre os dados obtidos através das técnicas de fenotipagem eritrocitária manual e automatizada foi de 98,6%. Já a implantação dessa metodologia teve um impacto positivo com o aumento em 1.649 amostras processadas a mais em relação ao mesmo período do ano anterior. [au]

Objective. Evaluate the impact of automation on expanded erythrocyte phenotyping and the level of agreement between it and the manual methodology in samples from blood donors treated at the blood center coordinating the Fundação HEMOPA from january to december 2019. Material and Methods. 2,700 erythrocyte phenotyping performed by manual and automated methodology using BioRad® IH500 equipment was analyzed. The results were tested for the level of agreement using the Kappa Coefficient test. Results. Of the phenotyped samples, 98,6% (2,662 / 2,700) were in agreement in both methodologies and only 1,4% (38/2700) were in disagreement. Of the 38 discordant samples, 31,6% referred to the Lu(b) phenotype; 15,8% to the Lu(a) phenotype; 13,1% to the Fy phenotype (b); 7,9% to Le(b), E, c phenotypes; 5,3% to N, S, s, Kp (a), P1 phenotypes; and 2,6% for phenotypes M, Jk(a), Jk(b), Fy(a). Conclusions. The level of agreement between data obtained through manual and automated erythrocyte phenotyping techniques was 98.6%. The implementation of this methodology had a positive impact, with an increase of 1,649 more processed samples compared to the same period of the previous year. [au]

Morphological changes in leukocytes of acute SARS-CoV-2 infection patients, Amazon, Brazil / Alterações morfológicas em leucócitos de pacientes com infecção aguda por SARS-CoV-2, Amazônia, Brasil

Introduction: The pandemic for the new coronavirus (SARS-CoV-2) brought many uncertainties about which laboratory parameters would be most suitable during the evolution of COVID 19. Objectives: Correlate the results of the blood count (BC), the neutrophil/lymphocyte ratio (N/LR), the C-reactive protein (CRP) and morphological findings of individuals diagnosed with SARS-CoV-2 infection through Polymerase Chain Reaction in Real Time (RT-PCR) in a private laboratory in Belém, Pará, from March to September 2020. Materials and Methods: Retrospective study with 30 individuals, of both sexes, any age and clinical complaint, of home or hospital origin who underwent BC, CRP and RT-PCR for COVID 19 until the 8th day of infection. Morphological changes were analyzed after selecting the slides for these patients. Results: Sample composed of 15 men and 15 women, aged between 7 and 92 years. Of these 12/30 individuals were at home and 18/30 were hospitalized. The main complaints were fever, malaise, diarrhea and respiratory distress. The statistical study showed a direct dependency relationship between increases in N/LR, CRP and the need for hospitalization (p = 0.0005). Morphological analysis showed hyposegmented neutrophils with toxic granulations, vacuolated monocytes, and reactive lymphocytes with basophilic cytoplasm. Conclusion: Our results associate intermediate and elevated levels of N/LR with increased CRP and disease severity, however, unrelated to the morphological findings in neutrophils, lymphocytes and monocytes that were common to all patients diagnosed up to the 8th day of infection (AU)

Introdução: A pandemia pelo novo coronavírus (SARS-CoV-2) trouxe muitas incertezas sobre quais parâmetros laboratoriais seriam mais adequados durante a evolução da COVID 19. Objetivos: Correlacionar os resultados do hemograma (HGM), da relação neutrófilos/linfócitos (R N/L), da proteína C reativa (PCR) e dos achados morfológicos de indivíduos diagnosticados com infecção por SARS-CoV-2 através de Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR) em um laboratório particular de Belém, Pará, no período de março a setembro de 2020. Materiais e Métodos: Estudo retrospectivo com 30 indivíduos, de ambos os sexos, qualquer idade e queixa clínica, de origem domiciliar ou hospitalar que realizaram HGM, PCR e RT-PCR para COVID 19 até o 8o dia de infecção. As alterações morfológicas foram analisadas após a seleção das lâminas desses pacientes. Resultados:Amostra composta por 15 homens e 15 mulheres, com idades entre 7 e 92 anos. Desses, 12/30 indivíduos estavam em domicílio e 18/30 internados. As principais queixas foram febre, mal-estar geral, diarreia e desconforto respiratório. O estudo estatístico mostrou a existência de relação de dependência direta entre os aumentos da R N/L, PCR e necessidade de internação (p=0,0005). A análise morfológica mostrou neutrófilos hipossegmentados com granulações tóxicas, monócitos vacuolizados e linfócitos reativos com citoplasma basofílico. Conclusão: Nossos resultados associam os níveis intermediários e elevados da R N/L com o aumento de PCR e a gravidade da doença, porém, sem relação com os achados morfológicos em neutrófilos, linfócitos e monócitos que foram comuns a todos os pacientes diagnosticados até o 8o dia de infecção

Morphological changes in leukocytes of acute SARS-CoV-2 infection patients, Amazon, Brazil / Alterações morfológicas em leucócitos de pacientes com infecção aguda por SARS-CoV-2, Amazônia, Brasil

RESUMO: Introdução: A pandemia pelo novo coronavírus (SARS-CoV-2) trouxe muitas incertezas sobre quais parâmetros laboratoriais seriam mais adequados durante a evolução da COVID 19. Objetivos: Correlacionar os resultados do hemograma (HGM), da relação neutrófilos/linfócitos (R N/L), da proteína C reativa (PCR) e dos achados morfológicos de indivíduos diagnosticados com infecção por SARS-CoV-2 através de Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR) em um laboratório particular de Belém, Pará, no período de março a setembro de 2020. Materiais e Métodos: Estudo retrospectivo com 30 indivíduos, de ambos os sexos, qualquer idade e queixa clínica, de origem domiciliar ou hospitalar que realizaram HGM, PCR e RT-PCR para COVID 19 até o 8o dia de infecção. As alterações morfológicas foram analisadas após a seleção das lâminas desses pacientes. Resultados:Amostra composta por 15 homens e 15 mulheres, com idades entre 7 e 92 anos. Desses, 12/30 indivíduos estavam em domicílio e 18/30 internados. As principais queixas foram febre, mal-estar geral, diarreia e desconforto respiratório. O estudo estatístico mostrou a existência de relação de dependência direta entre os aumentos da R N/L, PCR e necessidade de internação (p=0,0005). A análise morfológica mostrou neutrófilos hipossegmentados com granulações tóxicas, monócitos vacuolizados e linfócitos reativos com citoplasma basofílico. Conclusão: Nossos resultados associam os níveis intermediários e elevados da R N/L com o aumento de PCR e a gravidade da doença, porém, sem relação com os achados morfológicos em neutrófilos, linfócitos e monócitos que foram comuns a todos os pacientes diagnosticados até o 8o dia de infecção. (AU)

ABSTRACT: Morphological changes in leukocytes of acute SARS-CoV-2 infection patients, Amazon, BrazilORIGINAL ARTICLEIntroduction: The pandemic for the new coronavirus (SARS-CoV-2) brought many uncertainties about which laboratory parameters would be most suitable during the evolution of COVID 19. Objectives: Correlate the results of the blood count (BC), the neutrophil/lymphocyte ratio (N/LR), the C-reactive protein (CRP) and morphological findings of individuals diagnosed with SARS-CoV-2 infection through Polymerase Chain Reaction in Real Time (RT-PCR) in a private laboratory in Belém, Pará, from March to September 2020. Materials and Methods: Retrospective study with 30 individuals, of both sexes, any age and clinical complaint, of home or hospital origin who underwent BC, CRP and RT-PCR for COVID 19 until the 8th day of infection. Morphological changes were analyzed after selecting the slides for these patients. Results: Sample composed of 15 men and 15 women, aged between 7 and 92 years. Of these 12/30 individuals were at home and 18/30 were hospitalized. The main complaints were fever, malaise, diarrhea and respiratory distress. The statistical study showed a direct dependency relationship between increases in N/LR, CRP and the need for hospitalization (p = 0.0005). Morphological analysis showed hyposegmented neutrophils with toxic granulations, vacuolated monocytes, and reactive lymphocytes with basophilic cytoplasm. Conclusion: Our results associate intermediate and elevated levels of N/LR with increased CRP and disease severity, however, unrelated to the morphological findings in neutrophils, lymphocytes and monocytes that were common to all patients diagnosed up to the 8th day of infection. (AU)

Validation of the mindray BC6000 hematology analyzer for erythroblast counting in peripheral blood / Validação do analisador hematológico Mindray BC6000 para a contagem de eritroblastos em sangue periférico

ABSTRACT Introduction Differential counting of erythroblasts in blood samples by hematology analyzers still has limitations. Technological advances in blood count equipment have proposed the fully automated counting of these cells, however, not without its validation. Objective Validate the automated count of erythroblasts in peripheral blood in the Mindray BC6000 hematology analyzer and verify the existence of correlation of the maturation stages of erythroblasts with the equipment's graphics. Material and Methods Prospective study with peripheral blood samples from the Clinical Pathology Laboratory Dr Paulo C. Azevedo, regardless of age and gender, to validate the erythroblast count in the Mindray BC6000 hematology analyzer compared to the manual method (gold standard), in the period of June 2019 to December 2020. Results Seventeen peripheral blood samples were analyzed from newborns (09/17 - 52.3%) and from patients older than 2 years (08/17 - 47.7%) who had more than 18% of erythroblasts after morphological analysis of the sample. Statistical analysis of erythroblast counts by the two methodologies showed that the Mindray BC6000 hematological counter has good reproducibility, precision and linearity. There was no correlation between the maturation stages of erythroblasts and the equipment graphics. Conclusion The proposed validation showed that the Mindray BC6000 hematological counter has good analytical performance for counting erythroblasts in peripheral blood. However, there is no correlation between the maturation stages of erythroblasts with the graphics generated by the equipment.

RESUMO Introdução A contagem diferencial de eritroblastos em amostras de sangue por analisadores de hematologia ainda apresenta limitações. Os avanços tecnológicos nos equipamentos de hemograma têm proposto a contagem totalmente automatizada dessas células, porém, não sem sua validação. Objetivo Validar a contagem automatizada de eritroblastos no sangue periférico no analisador hematológico Mindray BC6000 e verificar a existência de correlação dos estágios de maturação dos eritroblastos com os gráficos do equipamento. Material e Métodos Estudo prospectivo com amostras de sangue periférico do Laboratório de Patologia Clínica Dr. Paulo C. Azevedo, independente de idade e sexo, para validação da contagem de eritroblastos no analisador hematológico Mindray BC6000 em comparação ao método manual (padrão ouro), no período de junho de 2019 a dezembro de 2020. Resultados Foram analisadas 17 amostras de sangue periférico de recém-nascidos (17/09 - 52,3%) e de pacientes maiores de 2 anos (17/08 - 47,7%) que apresentavam mais de 18% de eritroblastos após análise morfológica da amostra. A análise estatística das contagens de eritroblastos pelas duas metodologias mostrou que o contador hematológico Mindray BC6000 tem boa reprodutibilidade, precisão e linearidade. Não houve correlação entre os estágios de maturação dos eritroblastos e os gráficos do equipamento. Conclusão A validação proposta mostrou que o contador hematológico Mindray BC6000 apresenta bom desempenho analítico para contagem de eritroblastos em sangue periférico. Porém, não há correlação entre os estágios de maturação dos eritroblastos com os gráficos gerados pelo equipamento.

Avaliação comparativa entre analisadores hematológicos Mindray BC-6800 e URIT 5500, com ênfase na capacidade de detecção de blastos em pacientes portadores de leucemia aguda / Comparative evaluation between Mindray BC-6800 and URIT 5500 hematology analyzers, with emphasis on the ability to detect blasts in patients with acute leukemia

Comparar a capacidade dos analisadores hematológicos BC-6800 (Mindray) e URIT 5500 em sinalizar a presença de blastos em pacientes portadores de leucemia aguda. Foram analisadas 13 amostras de sangue periférico contendo blastos mielóide ou linfóide, provenientes de um hospital oncológico de Belém ­ Pará, previamente imunofenotipados por citometria de fluxo para verificar a capacidade dos equipamentos Mindray BC-6800 e URIT 5500 em sinalizar a presença dessas células no scatter leucocitário ou por emissão de ÀDJV. Para avaliação da existência de diferença estatística entre os resultados de hemácias, hemoglobina, leucócitos e plaquetas obtidos pelos equipamentos BC 6800 (Mindray) e URIT 5500 foi aplicado o teste não paramétrico ANOVA para análise de variância das amostras, o qual mostrou que não havia diferença estatística entre esses analitos. Não foi aplicado método estatístico para as contagens da diferencial leucocitária, pois o equipamento URIT 5500 não gerou dados numéricos para as amostras patológicas. Os dois equipamentos foram capazes de gerar ÀDJV e mudanças espacial do scatter leucocitário para amostras patológicas, contudo, o analisador BC 6800 (Mindray) foi o único a mudar a cor da população de blastos no scatter leucocitário. Os analisadores BC-6800 (Mindray) e URIT 5500 mostraram boa capacidade em sinalizar, através ÀDJV e do scatter leucocitário, para a presença de blastos mielóides ou linfóides em amostras patológicas. [au]

Compare the ability of the BC-600 (Mindray) and URIT 5500 hematological analyzers to signal the presence of blasts in patients with acute leukemia. Thirteen samples of peripheral blood containing myeloid or lymphoid blasts, from a cancer hospital in Belém - Pará, previously immunophenotyped by flow cytometry were analyzed to determine the capacity of the Mindray BC-6800 and URIT 5500 equipment in signaling the presence of these cells in the leukocyte scatter or by emitting flags. To assess the existence of statistical difference between the results of red blood cells, hemoglobin, leucocytes and platelets obtained by the BC 6800 (Mindray) and URIT 5500 equipments, the non-parametric ANOVA test was applied for analysis of variance of the samples, which showed that there was no statistical difference between these analytes. Statistical method was not applied for leukocyte differential counts, as the URIT 5500 equipment did not generate numerical data for the pathological samples. Both were able to generate flags and spatial changes from the leukocyte scatter to pathological samples, however the BC 6800 (Mindray) analyzer was the only one to change the color of the blast population in the leukocyte scatter BC-6800 (Mindray) and URIT 5500 analyzers showed good ability to signal, through flags and leukocyte scatter, for the presence of myeloid or lymphoid blasts in patholical samples. [au]

Análise qualitativa do teste de fragilidade osmótica para amostras processadas a fresco ou após 24 horas de incubação a 37ºC / Qualitative analysis of the osmotic fragility test for samples processed fresh or after 24 hours of incubation at 37ºC

Objetivo: Analisar qualitativamente o teste de fragilidade osmótica (F.O.) para amostras a fresco ou após incubação a 37°C. Métodos: Foram processadas 20 amostras de sangue periférico, coletadas em duplicata com 5mL em cada tubo com heparina, de pacientes com solicitação de F.O. como exame de rotina para processamento a fresco e após incubação por 24 horas em banho-maria a 37°C, em 13 tubos com concentrações variáveis de 0,1% a 0,9% de NaCl. Resultados: Foram analisadas 20 amostras de pacientes em sua maioria do gênero feminino 17/20 (85%), com idades entre 3 meses a 75 anos, para realização do teste de F.O. A análise qualitativa dos resultados mostrou que 9/20 (45%) amostras tiveram resultado concordante entre os testes de F.O. para amostras a fresco e após incubação a 37°C. Dos resultados discordantes, 8/11 (72,7%) resultados mostram fragilidade dos eritrócitos à hemólise nas amostras a fresco e curva normal (sem hemólise) após incubação da amostra a 37°C. Outros 3/11 (22,3%) resultados apresentaram curva normal (sem hemólise) no teste com amostra à fresco e resistência à hemólise no teste com a amostra após incubação a 37°C. Com o teste de Extato de Fisher não mostrou diferença estatística (p=0,5743) para as amostras processadas a fresco ou após incubação a 37°C. Conclusão: O teste de F.O. se mostrou mais eficiente quando a amostra testada foi analisada após incubação por 24 horas a 37°C em banho-maria, contudo não houve diferença estatística para resultados processados a fresco ou após incubação a 37°C.

Objective: Qualitatively analyze the osmotic fragility test (O.F.) for samples fresh or after incubation at 37°C. Methods: Twenty peripheral blood samples were processed, collected in duplicate with 5 ml in each tube with heparin, from patients with O.F. request. as a routine examination for fresh processing and after incubation for 24 hours in a water bath at 37°C, in 13 tubes with varying concentrations of 0.1% to 0.9% NaCl. Results: Twenty samples of patients were analyzed, mostly female, 17/20 (85%), aged between 3 months to 75 years, for the O.F. test. The qualitative analysis of the results showed that only 9/20 (45%) samples had a consistent result between the F.O. tests for fresh samples and after incubation at 37°C. From the discordant results, 8/11 (72.7%) results show fragility of erythrocytes to hemolysis in fresh samples and normal curve (without hemolysis) after sample incubation at 37o C. Other 3/11 (22.3%) results showed normal curve (without hemolysis) in the test with fresh sample and resistance to hemolysis in the test with the sample after incubation at 37o C. With the Fisher Extact test showing no statistical difference (p=0.5743) for samples processed fresh or after incubation at 37°C. Conclusion: The O.F. proved to be more efficient when the tested sample was analyzed after incubation for 24h at 37°C in a water bath, however, there was no statistical difference for results processed fresh or after incubation at 37°C.

Estudo Pioneiro sobre a Presença de Clone de Hemoglobinúria Paroxística Noturna durante Acompanhamento Terapêutico de Leucemia Aguda / Pioneering Study about the Presence of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Clone during Therapeutic Monitoring of Acute Leukemia / Estudio Pionero sobre la Presencia de un Clon de Hemoglobinuria Paroxística Nocturna durante el Seguimiento Terapéutico de la Leucemia Aguda

Introdução: O potencial de transformação maligna de células-tronco hematopoiéticas portadoras de mutações no gene glicosilfostatidilinositolclasse A (PIG-A) para leucemias agudas, embora raro, já é bem descrito na literatura. Objetivo: Neste estudo, porém, buscou-se evidenciar pela primeira vez na literatura o surgimento ou a manutenção de clones de hemoglobinúria paroxística noturna (HPN) em pacientes diagnosticados com leucemia aguda ou ainda após o início do tratamento quimioterápico. Método: A pesquisa de clones de HPN foi realizada por citometria de fluxo em blastos, hemácias, granulócitos ou monócitos de 47 amostras de sangue periférico e medula óssea de pacientes submetidos à investigação diagnóstica ou acompanhamento terapêutico, provenientes de dois hospitais oncológicos e públicos de Belém, no período de dezembro de 2017 a dezembro de 2018. Resultados: A presença de clones de HPN foi observada em 19/47 (40,4%) amostras de pacientes, em investigação diagnóstica ou acompanhamento terapêutico, que realizaram pelo menos um estudo de acompanhamento terapêutico e ainda tiveram o surgimento ou a manutenção do clone de HPN mesmo após iniciado o tratamento quimioterápico. Conclusão: Foi possível evidenciar, de forma primária, a presença de clones de HPN em pacientes diagnosticados com leucemia aguda tanto no período de investigação diagnóstica como durante o acompanhamento terapêutico, independentemente da ontogenia celular. Sem, porém, que se possa ainda avaliar a importância da presença desses clones de HPN para a evolução da doença primária, prognóstico ou necessidade de tratamento específico.

Introduction: The potential for malignant transformation of hematopoietic stem cells carrying mutations in theglycosylphosphatidylinositol class A (PIG-A) gene for acute leukemias, although rare, is already well described in the literature. Objective: In this study, however, it was attempted to show for the first time in the literature the emergence or maintenance of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) clones in patients diagnosed with acute leukemia or even after the beginning of the chemotherapy treatment. Method: The search of PNH clones was performed by flow cytometry in blasts, erythrocytes, granulocytes or monocytes of 47 samples of peripheral blood and bone marrow from patients undergoing diagnostic investigation or therapeutic follow-up in two oncological and public hospitals in Belém, from December 2017 to December 2018. Results: The presence of PNH clones was observed in 19/47 (40.4%) patient samples, in diagnostic investigation or therapeutic follow-up, who participated of at least one therapeutic follow-up study and still experience the appearance or maintenance of the PNH clone even after the beginning of the chemotherapy treatment. Conclusion: Primarily, it was possible to demonstrate the presence of PNH clones in patients diagnosed with acute leukemia both during the diagnostic investigation period and therapeutic follow-up, regardless of cell ontogeny. However, the importance of the presence of these PNH clones for the evolution of the primary disease, prognosis or need for specific treatment was not evaluated yet.

Introducción: El potencial de transformación maligna de las células madre hematopoyéticas que portan mutaciones en el gen glicosofosfatidilinositol (GPI) clase A (PIGA) para las leucemias agudas, aunque raro, ya está bien descrito en la literatura. Objetivo: En este estudio, sin embargo, buscamos mostrar por primera vez en la literatura la aparición o mantenimiento de clones de HPN en pacientes diagnosticados de leucemia aguda o incluso después del inicio de la quimioterapia. Método: La investigación de clones de hemoglobinuria paroxística nocturna (HPN) se realizó mediante citometría de flujo en blastos, eritrocitos, granulocitos o monocitos de 47 muestras de sangre periférica y médula ósea de pacientes sometidos a investigación diagnóstica o seguimiento terapéutico de dos hospitales oncológicos y públicos de Belém, durante el período. de diciembre de 2017 a diciembre de 2018. Resultados: La presencia de clones HPN se observó en 19/47 (40,4%) muestras de pacientes, en investigación diagnóstica o seguimiento terapéutico, que realizaron al menos un estudio de seguimiento terapéutico y aún tenían la aparición o mantenimiento del clon HPN incluso después de iniciado el tratamiento de quimioterapia. Conclusión: Se pudo evidenciar, de forma primaria, la presencia de clones de HPN en pacientes diagnosticados de leucemia aguda tanto durante el período de investigación diagnóstica como durante el seguimiento terapéutico, independientemente de la ontogenia celular. Sin embargo, no podemos todavía evaluar la importancia de la presencia de estos clones de HPN para la evolución de la enfermedad primaria, el pronóstico o la necesidad de un tratamiento específico.

Em busca do melhor aproveitamento de bolsas de concentrado de hemácia de baixo volume / In search of the best use of bags low-volume red blood cells concentrate

RESUMO: Introdução: A produção de bolsas de sangue total com volume inferior ao esperado é prevista na Portaria de Consolidação no 05/2017, porém, a sua dispensação hoje leva em consideração apenas o teor de hemoglobinas e hematócrito da bolsa. Objetivo: Determinar, a partir dos parâmetros técnicos brasileiros existentes, os critérios para o melhor aproveitamento para bolsas de concentrados de hemácias de baixo volume (CHBV) produzidas na Fundação HEMOPA. Material e métodos: Foram analisados volume, teor de hemoglobina e hematócrito de 525 bolsas de CHBV provenientes de bolsas duplas sem adição de conservante; triplas convencional com adição de SAG-M (soro fisiológico, adenina, glicose e manitol); triplas top and bottom (TAB) com adição de SAG-M; e quádruplas TAB com filtro "in line" e adição de SAG-M. Resultados: Foi observado que 71,43% (375/525) das bolsas de CHBV, independente do tipo da bolsa, apresentavam-se em conformidade para hematócrito e teor de hemoglobina em relação à legislação. As bolsas duplas e triplas convencionais apresentaram os maiores valores de teor de hemoglobina. Observou-se ainda que as bolsas de sangue total coletadas com volumes entre 350 e 404 ml geraram bolsas de CHBV com os menores índices de descarte. O maior descarte das bolsas de CHBV ocorreu quando o volume final ≤250 mL e hemoglobina ≤ 16 g/dL. Conclusão: Observou-se que o melhor aproveitamento das bolsas de CHBV ocorreu quando as bolsas de sangue total se encontravam com volumes entre 350 e 404 mL e as bolsas de CHBV apresentavam volume final ≥ 250 mL e hemoglobina ≥ 16g/dL.(AU)

ABSTRACT: Introduction: The production of whole blood bags with a lower volume than expected is approved in the Consolidation Ordinance number 05/2017; however, its dispensation today takes into account only the hemoglobin and hematocrit content of the bag. Objective: From the existing Brazilian technical parameters, determine the criteria for the best clinical use for low-volume red cell concentrate (LVRCC) bags produced at the HEMOPA Foundation. Material and methods: We analyzed volume, hemoglobin content, and hematocrit of 525 LVRCC bags from double bags without addition of preservative; conventional triple bags with the addition of SAG-M (saline, adenine, glucose, and mannitol); triples bags top and bottom (TAB) with the addition of SAG-M, and quadruple bags TAB with "in line" filter and the addition of SAG-M. Results: It was observed that 71.43% (375/525) of bags of LVRCC, regardless of bag type, were in conformance with hematocrit and hemoglobin content concerning Brazilian legislation. With the double and conventional triple bags, they had the highest values of hemoglobin content. It was also observed that the bags of whole blood collected with volumes between 350 and 404 mL generated LVRCC bags with the lowest rate of discard. The greatest discard of LVRCC bags occurred when the final volume ≤ 250 mL and hemoglobin ≤ 16 g/dL. Conclusion: It was observed that the best use of LVRCC bags occurred when the whole blood bags were between 350 and 404 mL and the LVRCC bags had a final volume ≥ 250 mL and hemoglobin ≥ 16 g/dL. (AU)

Distribuição ultraestrutural de colágeno tipo IV em feridas experimentais após tratamento com papaína / Ultrastructural distribution of type IV collagen in experimental wounds after treatment with papaine

RESUMO: Modelo do estudo: Experimental. Objetivo: Investigar a distribuição de fibras colágeno tipo IV, por microscopia eletrônica de transmissão, em feridas experimentais tratadas com soluções de papaína. Metodologia: Ratos Wistar (n=18), machos, adultos, foram submetidos a procedimento cirúrgico para a retirada de seção quadrada de pele da região cervical, e posteriormente separados em dois grupos: Grupo I (n = 9), sem tratamento; e Grupo II (n = 9), tratado com soluções de papaína a 10% (até o 7º dia), 6% (do 8º ao 14º dia) e 4% (do 15º ao 21º dia). Todos os animais foram sacrificados com 7, 14 e 21 dias, e as áreas lesadas retiradas, lavadas em PBS e fixadas em 2,5% de glutaraldeo, 4% de formaldeio recém preparado, em solução tamponada contendo 60 mM Pipes, 20 mM Hepes, 10 mM etilenoglicol-bis- (B-aminoetiléter) - Ácido N, N, N'-tetraacético, KCl 70 mM e MgCl2 5 mM pH 7,2 por 1h; pós-fixadas em solução contendo tetróxido de ósmio a 1%, ferrocianeto a 0,8% e cloreto de cálcio a 5 mM; desidratados em acetona graduada e embebidos em Epon® para confecção de secções finas, coradas com acetato de uranilo e citrato de chumbo, e examinadas em microscópio electrônico de transmissão Zeiss LEO EM 906 (TEM). Resultados: A distribuição das fibras colágeno tipo IV das lesões tratadas com papaína (Grupo II), com 14 e 21 dias, mostraram-se mais organizadas que as fibras do Grupo I. Conclusões: A papaína mostrou-se um importante facilitador para a organização de fibras colágeno tipo IV em feridas experimentais. (AU)

ABSTRACT Study model: Experimental. Objective: Investigate the distribution of type IV collagen fibers by transmission electron microscopy, in experimental wounds treated with papaine solutions. Methodology: Adult male Wistar rats (n = 18) underwent a surgical procedure to remove a square section of skin from the cervical region, and then separated into two groups: Group I (n = 9), without treatment; and Group II (n = 9), treated with papain solutions of 10% (up to the 7th day), 6% (from the 8th to the 14th day) and 4% (from the 15th to the 21st day). All animals were sacrificed at 7, 14 and 21 days, and the injured areas removed, washed in PBS, and fixed in 2.5% glutaraldehyde, 4% freshly prepared formaldehyde in buffered solution containing 60 mM Pipes, 20 mM Hepes, 10 mM ethyleneglycol-bis- (B-aminoethylether) -N, N, N'-tetraacetic acid, 70 mM KCl, and 5 mM MgCl 2 pH 7.2 for 1h; post-fixed in solution containing 1% osmium tethoxide, 0.8% ferrocyanide, and 5 mM calcium chloride; dehy-drated in graduated acetone and soaked in Epon® to make thin sections stained with uranyl acetate and lead citrate and examined under a Zeiss LEO EM 906 (TEM) transmission electron microscope. Results: The distribution of type IV collagen fibers from papaine-treated lesions (Group II) at 14 and 21 days was more organized than Group I fibers. Conclusions: Papaine has proven to be an important facilitator for the organization of type IV collagen fibers in experimental wounds. (AU)

Report of a case of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) with complex evolution and liver transplant / Relato de um caso de hemoglobinúria paroxística noturna (HPN) com evolução complexa e transplante hepático

ABSTRACT The paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is a rare acquired disease, with thrombotic episodes and frequent pancytopenia. We report the case of a 32 year-old female PNH patient with bone marrow aplasia, which followed a complex course, diagnosed with aplastic anemia associated with PNH, evolving in three years with Budd-Chiari syndrome and liver transplantation. Post-transplant complications, hepatic arterial thrombosis, graft rejection, liver retransplantation and treatment of PNH with eculizumab. Clinical stabilization and cessation of symptoms were achieved.

RESUMO Hemoglobinúria paroxística noturna (HPN) é uma doença rara, adquirida, com episódios trombóticos e pancitopenia frequente. Relatamos o caso de uma paciente jovem, 32 anos, sexo feminino, portadora de HPN e aplasia de medula, com evolução complexa e diagnóstico de anemia aplástica associada à HPN, evoluindo em três anos com síndrome de Budd-Chiari e transplante hepático. Complicação pós-transplante, trombose arterial hepática, rejeição do enxerto, retransplante hepático e tratamento da HPN com eculizumab. Obtiveram-se estabilização clínica e cessação dos sintomas.

Evaluation of the immunological cellular response of Cebus apella exposed to the carcinogen N-methyl-N-nitrosourea and treated with CANOVA®.

The immune response modifier Canova® is a homeopathic remedy indicated for patients with depressed immune system, since this drug appears to increase adaptive immunity and induce an immune response against multiple and severe pathological conditions, including cancer. We evaluated the pattern of immune cellular response in non-human primates of the species Cebus apella exposed to N-methyl-N-nitrosourea (MNU) with and without Canova®. Twelve animals were divided into four groups, with three animals each: negative control and three experimental groups, MNU-alone (35 days); MNU (35 days)-plus-Canova® (3 days) and Canova®-alone (3 days). The animals received MNU orally and Canova® by three intravenous injections. Evaluation of the cellular immune response was performed by immunophenotyping of T-lymphocytes (CD4(+), CD8(+)), B-lymphocytes and natural killer cells. Analysis was also performed of the cell cycle. Our results suggest an increase of T-lymphocytes (CD4(+)CD3(+)) only in the Canova® group, while in the MNU-plus-Canova® group only B-lymphocytes increased.

Incidência dos genótipos 16 e 18 do HPV em mulheres de cidade da região amazônica. / Incidence of HPV genopypes 16 and 18 in women in city amazon region

OBJETIVO: estudar a incidência dos genótipos 16 e 18 do HPV em mulheres, com ou sem citologia associada a efeito citopático compatível com HPV, provenientes do município de Barcarena - Pará. MÉTODO: participaram deste estudo 50 voluntarias, através de coleta cérvico-vaginal para realização de PCR-RT para HPV 16 e 18, e citologia convencional. RESULTADOS: a citologia mostrou prevalência de 02/50 casos de LSIL/NICI, associadas ao efeito citopático compatível com HPV. O genótipo 16 do HPV ocorreu em 04/05 casos e os genótipos 16/18 ocorreram em 01/05 casos, principalmente em mulheres que apresentavam lesões do tipo ASC-US ou LSIL/NIC I. CONSIDERAÇÕES FINAIS: a presença de alterações citológicas do tipo ASC-US ou LSIL/NIC I (p=0,0166) representou um importante alerta para a possível infecção pelos tipos 16 e 18 do HPV.

OBJECTIVE: studying the incidence of HPV genotypes 16 and 18 in women, with or without cytology associated with HPV, living in the municipality of Barcarena, Pará. METHOD: fiftyvolunteers participated in the study through cervicovaginal sampling for PCR-RT to test for HPV 16 and 18 and for conventional cytology of smears. RESULTS: cytology showed an incidence of 02/50 cases of LSIL/CINI associated with a cytopathic effect compatible with HPV. Genotype 16 of HPV occurred in 04/05 cases and genotype 16/18 in 01/05 cases, mainly in women who showed lesions of the ASC-US or LSIL/CINI type. CONCLUSIONS: the presence of cytological changes of the ASC-US or LSIL/CINI type (p=0.0166) represents an important flag for possible infection by HPV types 16 and 18.

Case report of adult T-cell lymphoma/leukemia / Relato de caso de linfoma/leucemia de células T do adulto

The adult T-cell leukemia/lymphoma (ATLL) is a rare type of lymphoma caused by human T lymphotropic virus type 1 (HTLV-1). The clinical manifestations include cutaneous lesions, adenopathies, myelopathy/ tropical spastic paraparesis, uveitis, ophthalmological diseases, leukocytosis with lymphocytosis and atypical lymphocytes. The main objective of this study was to report a case of a female patient with ATLL, a farmer with leukocytosis, lymphocytosis, bilateral ocular erythema, cervical lymphadenopathy, in the abdominal visceromegalies and with positive markers for T-cell lymphocytes (CD45, CD2, CD3, CD5, CD4 and CD25). Although ATLL is a rare disease, its delayed diagnosis may lead to serious complications and fatal outcome.

O linfoma/leucemia de células T do adulto (ATLL) é um tipo raro de linfoma causado pelo vírus T-linfotrópico humano tipo I (HTLV-1). O quadro clínico inclui lesões de pele, adenomegalias, mielopatia/paraparesia espástica tropical, uveíte, doença oftalmológica, leucocitose com linfocitose e linfócitos atípicos. O objetivo deste estudo foi relatar o caso de uma paciente com ATLL, agricultora, com leucocitose, linfocitose, eritema ocular bilateral, linfadenopatia cervical, sem visceromegalias abdominais e com marcadores positivos para linfócitos T (CD45, CD2, CD3, CD5, CD4 e CD25). Embora a ATLL seja uma doença rara, a demora no seu diagnóstico pode levar a sérias complicações e ocasionar a morte do paciente.

Perfil epidemiológico de doadores de sangue inaptos por sorologia para Hepatite C / Demografhic characteristics of hcv eia repeat reactive blood donors

Introdução: a hepatite C atinge cerca de 3,2 milhões de pessoas somente no Brasil, com 2,1% dos casosna região Norte. Objetivo: analisar o perfil epidemiológico dos doadores inaptos sorológicos parahepatite C no Hemonúcleo de Tucuruí/PA ? HENTU. Casuística e Método: pesquisa descritiva,retrospectiva, com 51 doadores de sangue inaptos do HENTU no período de janeiro/2005 adezembro/2009, sendo os dados coletados através das fichas de cadastro dos doadores participantes dapesquisa. Resultados: observou-se uma taxa de prevalência para HCV de 0,44% no período do estudo,com predomínio de doadores do sexo masculino (66,67%), na faixa etária de 18 a 45 anos (82,35%) e amaioria de doadores de 1ª vez (70,59%). Não houve diferença na prevalência de inaptidão para HCVcom relação ao estado civil entre casados e solteiros. Conclusão: a maior inaptidão de doadores desangue por sorologia alterada para o HCV foi observada em adultos jovens, do gênero masculino, quedoaram pela 1ª vez, o que aponta ser este o grupo entre os doadores de sangue do HENTU de maiorrisco para transmissão pelo vírus da hepatite C.

Introduction: Hepatitis C reaches about 3,2 million people only in Brazil, with 2,1% of the cases in the regionNorth. Objective: to analyze the epidemiological profile of unsuitable donors screening for hepatitis C inHemonúcleo Tucuruí / PA - HENTU. Casuistic and Methods: descriptive study, retrospective, with 51 blooddonors HENTU unfit for the period of the January/2005 December/2009, with data collected through registrationforms donor research participants. Results: there was a prevalence rate for HCV of 0.44% during the studyperiod, with a predominance of male donors (66.67%), aged 18 to 45 (82.35%) and most 1st time donors(70.59%). There was no difference in the prevalence of HCV in relation to disability or marital status betweenmarried and unmarried. Conclusion: the greatest inadequacy of blood donors by serology changed to HCV wasobserved in young adult males, who donated the 1st time what points to be the group among blood donorsHENTU higher risk for transmitting the virus Hepatitis C.

Relato de caso de leucemia de células pilosas / Case report of hairy cell leukemia

A leucemia de células pilosas (LCP) é um tipo raro de linfoma não Hodgkin de células B. O quadro clínico inclui esplenomegalia, pancitopenia e linfocitose. Estudos de carcinogênese da doença revelam sua associação a agentes químicos agrícolas. O objetivo deste estudo foi o relato de um caso de paciente com LCP, masculino, tratorista, com pancitopenia, lesões de pele, sem esplenomegalia e com marcadores positivos para linfócitos B (CD19, CD20, CD22, CD79b, CD23, Lambda, imunoglobulina M [IgM], CD25 e CD103). Embora a LCP seja uma doença rara, a demora em seu diagnóstico pode levar a sérias complicações e à morte do paciente antes do diagnóstico.

Hairy cell leukemia (HCL) is a rare type of B-cell non-Hodgkin's lymphoma. The clinical symptoms include splenomegaly, pancytopenia, and lymphocytosis. Studies on its carcinogenesis reveal association with exposure to agricultural chemical agents. The objective of this study was to report the case of a male patient, tractor operator, diagnosed with HCL, pancytopenia, cutaneous lesions, without splenomegaly and positive markers for B-cell lymphocytes (CD19, CD20, CD22, CD79b, CD23, Lambda, immunoglobulin M [IgM], CD25 and CD103). Although HCL is a rare disease, late diagnosis may ultimately lead to severe complications and patient's death.

Diagnóstico de imunofenótipos de síndromes linfoproliferativas crônicas por citometria de fluxo na Fundação HEMOPA / Diagnosis of immunophenotyping of chronic lymphoproliferative syndromes by flow cytometry at HEMOPA blood center

INTRODUÇÃO: As síndromes linfoproliferativas formam um grupo heterogêneo de neoplasias malignas com diferentes comportamentos clínicos, fatores patológicos e características epidemiológicas e podem ter seu diagnóstico geral com base na morfologia das células linfoides observadas no sangue periférico. OBJETIVO: Testar a factibilidade diagnóstica do método de imunofenotipagem por citometria de fluxo para síndromes linfoproliferativas a partir da definição de um painel mínimo de anticorpos. MATERIAL E MÉTODOS: Participaram 47 pacientes para diagnóstico diferencial dos subtipos de síndromes linfoproliferativas por citometria de fluxo, no período de julho de 2008 a julho de 2010, atendidos na Fundação HEMOPA. RESULTADOS: A mediana de idade dos pacientes foi de 68 anos, não houve diferença estatística entre os sexos e o subtipo de síndromes linfoproliferativas mais frequente foi a leucemia linfoide crônica/linfoma linfocítico de pequenas células B. CONCLUSÃO: O método de imunofenotipagem por citometria de fluxo, ao lado da morfologia, de amostras de sangue periférico mostrou-se uma metodologia auxiliar, segura, rápida, factível e não invasiva para o diagnóstico de síndromes linfoproliferativas crônicas a partir do painel de anticorpos sugerido.

INTRODUCTION: Lymphoproliferative syndromes comprise a heterogeneous group of malignant neoplasias with different clinical behaviors, pathological factors and epidemiological characteristics, whose diagnosis may be based on lymphoid cell morphology observed in peripheral blood. OBJECTIVE: To test the diagnostic feasibility of immunophenotyping by flow cytometry for lymphoproliferative syndromes through the definition of minimal antibody panel. MATERIAL AND METHODS: During the period of July 2008 to July 2010, 47 patients from HEMOPA blood center participated in this study for differential diagnosis of lymphoproliferative syndromes subtypes by flow cytometry. RESULTS: The mean age was 68 years old. There was no statistical difference between genders, and the most frequent subtype of lymphoproliferative syndromes was chronic lymphoid leukemia/small B-cell lymphocytic lymphoma. CONCLUSION: Based on the antibody panel recommended in this investigation, the immunophenotyping method by flow cytometry associated with morphological characterization of peripheral blood samples is a reliable, rapid, feasible, and non-invasive procedure for the diagnosis of chronic lymphoproliferative syndromes.